重组鸡Cathelicidins类抗菌肽的融合表达及其对金黄色葡萄球菌抗菌活性的研究

Cathelicidins抗菌肽在家禽天然免疫系统中发挥重要作用,本研究将已构建的含Cathelicidins抗菌肽成熟肽的阳性克隆菌株Rosetta(DE3)/pET30-CathL1S、pET30-CathL2S、pET30-CathL3S分别在37℃、1.0 mmol/L IPTG的条件下进行诱导表达。SDS-PAGE和Western blotting分析结果表明,Cathelicidins成熟肽片段均在大肠杆菌中以融合形式成功表达,表达产物的表观分子质量分别为7、8、7.5 ku。琼脂糖孔穴扩散法检测结果显示,表达产物对多种革兰氏阴性菌和阳性菌均具有很好的抑制活性,其对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、藤黄微球菌(Micrococcus luteus)、大肠杆菌(Escherichia coli)、鸡白痢沙门氏菌C79-13 (Salmonella pullorum)、巴氏杆菌、鸭疫里默氏杆菌及绿脓杆菌等供试菌株均有较强的抑制作用,尤其对抗生素耐药菌株有明显的抑制作用。以雏鸡为实验模型研究重组抗菌肽对金黄色葡萄球菌的体内抗菌活性,结果表明,注射中、高剂量CathL-1抗菌肽试验组(5、10 mg/kg),在试验结束后取肝脏组织匀浆液涂布于TMP平板,未分离到葡萄球菌。各抗菌肽试验组平均增重均高于感染对照组,其中低剂量抗菌肽试验组(2.5 mg/kg)体内抑菌效果虽与普通抗生素相当,但其增重效果尤为明显。     

坏死梭杆菌外膜蛋白基因的克隆与表达

依据GenBank中登录的坏死梭杆菌外膜蛋白(outer membrane protein,OMP)基因序列,设计1对引物进行PCR扩增OMP片段并克隆至pET-28a中,构建原核表达重组质粒pET-28a-OMP。将pET-28a-OMP转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态中,表达含2个His的重组蛋白。SDS-PAGE和Western blotting分析结果表明,该重组蛋白分子质量为93 ku,为包涵体表达,具有反应原性。本试验结果为坏死梭杆菌OMP免疫机制的研究提供了基础数据。     

假蒟的研究进展

综述国内外在假蒟提取物的化学成分、药理活性如抑菌、杀虫、化感、驱避、抗氧化作用等研究进展,旨在为假蒟作为饲料添加剂在畜禽养殖业中的开发利用提供科学依据。     

载板蓝根多糖MPEG-PLA聚合物微球对小鼠免疫力的影响

为研究载板蓝根多糖微球的免疫增强作用。利用实验室制备的载板蓝根多糖MPEG-PLA聚合物微球免疫小鼠,并测定小鼠血液的常规指标,即白细胞和淋巴细胞总数以及总IgG水平和腹腔巨噬细胞吞噬能力等免疫指标。结果表明：在给药后第7天和第14天,载板蓝根多糖微球40、20、10 mg组和板蓝根多糖组小鼠的各项免疫指标均高于空白微球组和生理盐水组,并且载板蓝根多糖微球各组在第14天时的免疫效果与第7天时的免疫效果相比较差异不显著,其中,微球组中以载板蓝根多糖微球20 mg组的免疫效果为最好,在第7天和第14天时小鼠的白细胞和淋巴细胞总数分别为(0.96±0.46)和(11.03±0.35)以及(8.73±0.51)和(9.44±0.42),总IgG水平为(33.541±0.458)和(32.713±0.481),巨噬细胞吞噬指数和吞噬百分率则分别达到(56.00±2.16)和(1.61±0.04)。载板蓝根多糖微球具有一定的免疫增强作用,虽然微球的短期免疫效果均低于纯板蓝根多糖,但是可达到长效免疫。     

裂蹄木层孔菌发酵产物抑菌活性的研究

为了研究裂蹄木层孔菌发酵产物对植物病原菌的抑菌活性。采用菌丝生长速率法测定裂蹄木层孔菌不同发酵时间的产物对7种供试病原菌的抑制作用,将裂蹄木层孔菌的发酵产物进行不同的处理,分级纯化抑菌活性多糖,比较其抑菌活性。结果表明：裂蹄木层孔菌发酵产物对7种病原菌均有抑制作用;发酵时间为20天的裂蹄木层孔菌发酵产物对杨树烂皮病的抑制率最高;裂蹄木层孔菌发酵产物的主要抑菌活性物质存在于发酵上清液醇提物中;醇沉级别为30%（浓度为50 mg/mL）醇提物中的多糖对病原菌的抑制率为供试醇沉级别中最高。说明裂蹄木层孔菌含有抑制病原菌的有效成分,具备成为新型生物农药的潜力。     

补光对烟苗生长及主要生理指标的影响

为解决湖南冬季大棚育苗低温寡照的障碍,研究光照强度对烟苗生长及主要生理指标的影响。在水温恒定条件下分别采用LED蓝:红=1:1的配比组合灯补光（补光强度分别为3000、4500、6000 lx）,结果表明：随光照强度的增加,烟苗的出叶天数减少,而叶片生长速率加快,各处理存在显著差异;补光强度达到6000 lx,烟苗茎粗,茎高、干鲜重和干鲜比大,幼苗干物质积累最多;质体色素和根系活力受光照强度影响较大,其中叶绿素a、叶绿素b、类胡萝卜素和根系活力随光照强度增强而升高,而叶绿素a/b比值减少,表明补光有利于培育烟草壮苗,可以提高成苗素质。     

8种4-甲基香豆素衍生物的合成及其农药活性

香豆素类化合物的生物活性与苯并吡喃环上取代基的种类及其位置密切相关,研究不同取代香豆素的农药生物活性,以期发现有价值的农药先导化合物。以间苯二酚为起始原料,合成了8种4-甲基香豆素衍生物。采用菌丝生长速率法和种子萌发法测定了合成化合物的抑菌及除草活性。结果表明：6种4-甲基香豆素衍生物对4种供试植物病原真菌具有一定抑制作用,其中4-甲基-7-羟基-8-苯甲酰基香豆素的抑菌活性最强,对苹果腐烂病菌的EC50为62.40 mg/L,对葡萄白腐病菌的EC50为69.22 mg/L;4-甲基-7-羟基-8-邻氟苯甲酰基香豆素次之,对葡萄白腐病菌EC50接近100 mg/L。4-甲基-7-丙酰氧基香豆素除草活性较强,1000 mg/L下对反枝苋及生菜种子幼根生长的抑制率均大于43%。由此可见,4-甲基-7-羟基香豆素7位酯化使抑菌作用降低,7位苯甲酰基及邻氟苯甲酰基重排至8位后抑菌活性明显增强;合成化合物的除草活性均较弱。     

11株侧柏内生真菌的农药活性及分子生物学鉴定

分别采用生长速率法和种子萌发法测定了11株侧柏内生真菌J46、J77、J80、J85、J86、J94、Y51、Y52、Y57、Y125、Y127发酵液对苹果腐烂病菌、番茄灰霉病菌等12种植物病原菌的抑菌活性及对反枝苋种子的除草活性。结果表明,有10株内生真菌对至少一种植物病原菌的抑制率大于50%;其中Y52、J94、Y127、J77、J46等5种内生真菌对苹果腐烂病菌的抑制率高于70%,J94、Y52、J77、J46等4种内生真菌对番茄灰霉病菌抑制率高于70% 。内生真菌对反枝苋种子幼根的生长表现出较强抑制作用,抑制率在70%以上的有8株。对筛选出的8株具有较好抑菌或除草活性的侧柏内生真菌进行了ITS 序列系统发育分析,确定其均为链格孢属链格孢菌（Alternaria alternaria）。     

烤烟成熟期控水对烟叶碳氮代谢关键酶活的影响?

成熟期是烤烟需水次临界期。为明确烤烟成熟期土壤水分对烟叶碳氮代谢的影响,试验在烤烟成熟期进行土壤控水,研究烟叶碳氮代谢主要关键酶活性的变化。结果表明：土壤水分亏缺（50%~60%田间持水量）致烟叶叶绿素含量降低,土壤水分充足（80%~85%田间持水量）烟叶绿素含量高,烟叶成熟缓慢,且复水能缓解干旱胁迫导致的烟叶早衰;烟叶成熟期,湿润土壤（70%~85%田间持水量）烟叶硝酸还原酶、转化酶和淀粉酶活性较高,土壤干旱使烟叶碳氮代谢关键酶活性减弱,但复水在一定程度上能恢复淀粉酶活性。     

粳稻谷储藏期间品质变化的动力学研究

通过对不同温度条件下(15℃、20℃、25℃、30℃)储藏的粳稻谷过氧化物酶(POD)活性、峰值粘度变化进行监测(储藏时间为180d,测定周期为30d),结合动力学分析方法,在研究储藏条件对粳稻谷品质影响的基础上建立相应的品质变化预测模型。结果表明:过氧化物酶活性随着储藏时间的延长而逐渐下降,且温度越高,下降得越快,在温度为30℃、25℃、20℃、15℃条件下储藏180d后,粳稻谷过氧化物酶残余活力依次下降至16.74%、23.85%、38.35%、40.17%;峰值粘度随着储藏时间的延长而呈现波动上升的趋势,温度越高,上升的趋势越明显,在30℃条件下储藏180d后,峰值粘度上升至3495cP,而在温度为25℃、20℃、15℃条件下储藏的粳稻谷样品,峰值粘度依次上升至3307cP、3262cP、3018cP。粳稻谷过氧化物酶活性、峰值粘度的预测模型依次是:lnAt=-e-31007.16/RT×t+4.6052、lnAt=-e-24467/RT×t+7.7337。动力学模型预测值与实际测量值的相对误差在1%~12%之间,可以对储藏期间粳稻谷品质变化进行预测。